期刊论文

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湖南畜牧兽医

1006-4907

2022

02

45-50

10.3969/j.issn.1006-4907.2022.02.019

21A0442:湖南省教育厅科学研究项目 2021JJ30060:湖南省自然科学基金面上项目 2021NK2026:湖南省重点研发计划 202110546001:国家级大学生创新创业训练计划项目

本校为第一机构

[目的]：提高重组猪表皮生长因子（pEGF）的表达量和纯化量，为后续研究pEGF对仔猪生长发育的影响奠定基础。[方法]：将人工合成的pEGF基因克隆至pEGF4T-1载体，转化至大肠杆菌Rossetta（DE3）中，得到重组菌株Rossetta（DE3）-pGEX-pEGF,IPTG诱导表达，进行表达条件的优化，用GST-tag亲和层析纯化方法进行纯化。[结果]：pEGF基因大小为159 bp，融合表达蛋白分子量为32k Da，最佳诱导表达条件为IPTG浓度0.01mmol/L、诱导温度15℃和诱导时间24h。流穿液和洗涤液中目的蛋白含量极少，洗脱液得到了高纯度的GST-pEGF融合蛋白，纯化较为成功。[结论]：成功构建了pEGF表达菌株，得到了最优的诱导表达条...