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一种分段补料发酵生产鲜味肽的方法

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成果类型:
专利
发明/设计人:
孙伟峰;伍圆明;王莉;伍伦杰;陈晓华;...
申请/专利权人:
衡阳师范学院
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2019-03-05
申请/专利号:
CN201910163211.X
公开时间:
2019-05-03
公开号:
CN109706206A
主申请人地址:
421002 湖南省衡阳市珠晖区衡花路16号
申请地区:
421002 湖南省衡阳市珠晖区衡花路16号
代理人:
郭艳艳
机构署名:
本校为其他完成单位
主权项:
1.一种分段补料发酵生产鲜味肽的方法,其特征在于,包括以下步骤: (1)菌种活化:将鲜味肽生产菌株接种至LB固体培养基上,在37℃条件下活化培养8~10h; (2)摇瓶培养:取活化后的鲜味肽生产菌株接种至LB液体培养基中,在200rpm、37℃条件下培养至OD600=0.6,之后按0.05%~0.2%的接种量转入LB液体培养基中,在200rpm、37℃条件下摇瓶培养8h作为种子培养液备用; (3)分段补料发酵:将种子培养液接种至基础发酵培养基中进行培养,当基础培养基中碳源浓度在5g/L以下时启动指数补料控制,进行指数流加补料,自诱导生产鲜味肽;指数流加的补料速度如(1)式所示: 式中F表示补料流加速率;μ表示菌体比生长速率,并且μ分段;X0表示开始补料时发酵罐内的菌体浓度;V0表示开始补料时发酵罐内的培养基体积;SF表示补料培养基中的底物葡萄糖浓度;YX/S菌体生长基于底物的得率系数,t表示补料时间。 2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中所述鲜味肽包括氨基酸序列为Ser-Ser-Arg-Asp-Glu-Gln-Ser-Arg的多肽。 3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:所述鲜味肽的表达菌为枯草芽孢杆菌,表达载体为pMA09srfA,启动子为具有自诱导特性的srfA启动子。 4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(3)中μ值分段包括4个阶段,时间从补料开始时计算,分别为0~4h、4~8h、8~14h、14~20h,各阶段的μ值分别为0.45~0.5、0.25~0.35、0.15~0.2、0~0.1。
摘要:
本发明公开了一种分段补料发酵生产鲜味肽的方法,该方法是先对鲜味肽生产菌株进行活化;然后将活化后的鲜味肽生产菌株接种至LB液体培养基中进行扩大培养,得种子培养液;再将种子培养液接种至基础发酵培养基中进行培养,当基础培养基中碳源浓度在5g/L以下时启动指数补料控制,进行指数流加补料,自诱导生产鲜味肽,指数流加的补料速度按公式进行。采用本发明中的方法,能够在充分满足菌体碳源需求的同时,有效地避免了因碳源积累而引起的底物抑制,显著提高目标产物的产量,为鲜味肽及蛋白质的大规模生产奠定了理论基础。

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