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一种青蒿WRKY类转录因子AaWRKY4基因及应用

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成果类型:
专利
发明/设计人:
江伟民;邢世海;黄慧珍
申请/专利权人:
衡阳师范学院
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2020-12-04
申请/专利号:
CN202011403247.X
公开时间:
2021-02-19
公开号:
CN112375767A
主申请人地址:
421008 湖南省衡阳市雁峰区黄白路165
申请地区:
中国湖南
代理人:
李佳俊%郭国中
机构署名:
本校为其他完成单位
主权项:
1.一种青蒿WRKY类转录因子AaWRKY4基因,其特征在于,所述AaWRKY4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。 2.一种青蒿AaWRKY4蛋白,其特征在于,所述AaWRKY4蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。 3.一种重组表达载体,其特征在于,所述重组表达载体包含如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。 4.一种重组表达转化体,其特征在于,所述重组表达转化体包含如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。 5.根据权利要求4所述的重组表达转化体,其特征在于,所述重组表达转化体的宿主菌株为根癌农杆菌EHA105。 6.根据权利要求1所述的青蒿WRKY类转录因子AaWRKY4基因在提高青蒿素含量中的应用。 7.一种青蒿WRKY类转录因子AaWRKY4基因提高青蒿中青蒿素含量的方法,其特征在于,包括以下步骤: 步骤一、采用基因克隆方法获得青蒿WRKY类转录因子AaWRKY4基因,所述AaWRKY4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示; 步骤二、把所述AaWRKY4基因连接于表达调控序列,构建含AaWRKY4基因的植物表达载体; 步骤三、将含AaWRKY4基因的植物表达载体转化宿主菌株,获得具有所述植物表达载体的菌株; 步骤四、利用步骤三中构建的所述菌株转化青蒿,经抗生素筛选得到抗性苗,再经PCR检测得到整合外源目的基因AaWRKY4的转基因青蒿植株; 步骤五、对步骤四中得到的所述转基因青蒿植株中青蒿素含量进行HPLC-ELSD测定,筛选获得青蒿素含量提高的转基因青蒿植株。 8.根据权利要求7所述的一种青蒿WRKY类转录因子AaWRKY4基因提高青蒿中青蒿素含量的方法,其特征在于,所述步骤一中,基因克隆方法中,使用的上游引物序列如SEQ IDNO.1所示;下游引物序列如SEQ ID NO.2所示。 9.根据权利要求7所述的一种青蒿WRKY类转录因子AaWRKY4基因提高青蒿中青蒿素含量的方法,其特征在于,所述步骤四中,PCR检测中使用的上游引物序列如SEQ ID NO.3所示;下游引物序列如SEQ ID NO.4所示。
摘要:
本发明提供一种青蒿WRKY类转录因子AaWRKY4基因及应用。AaWRKY4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示;AaWRKY4蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。过量表达AaWRKY4基因提高青蒿中青蒿素含量的方法如下:从青蒿中克隆青蒿WRKY类转录因子AaWRKY4基因;构建含AaWRKY4基因的植物表达载体;用根癌农杆菌介导,将AaWRKY4基因转入青蒿并再生出植株;PCR检测目的基因整合情况;HPLC‑ELSD测定转基因青蒿中青蒿素的含量,筛选获得青蒿素含量提高的转基因青蒿植株。本发明提供的转AaWRKY4基因青蒿的青蒿素含量比非转化青蒿提高了35%‑50%,为青蒿素的规模化生产提供了高产、稳定的植物基源。

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