本发明公开了一种鲜味肽和鲜味肽调味料以及它们的制备方法,其中,鲜味肽包括氨基酸序列为Lys‑Gly‑Ser‑Leu‑Ala‑Glu‑Glu‑Glu的多肽,其制备方法为:将尼罗罗非鱼捣碎,加入蛋白水解酶进行酶解,再对酶解产物离心、浓缩,然后用SephadexG‑15色谱柱对浓缩液进行分离,取其中的第三个组分,用RP‑HPLC对该组分进行分离,取其中的第二个组分,得鲜味肽。鲜味肽调味料的制备方法为:将上述制得的鲜味肽加入美拉德反应基料中,在105~125℃条件下经过美拉德反应制得。本发明中的鲜味肽和调味料不仅味道鲜美,而且具有较高的营养价值,是一种理想的味道调节制品。