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一种致病性大肠杆菌噬菌体口服制剂及其制备方法

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成果类型:
专利
发明/设计人:
唐青海;杨海;阳坤;滕威;杨灿;...
申请/专利权人:
衡阳师范学院
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2019-12-02
申请/专利号:
CN201911213157.1
公开时间:
2020-04-24
公开号:
CN111053790A
主申请人地址:
421000 湖南省衡阳市珠晖区衡花路16号衡阳师范学院
代理人:
刘熙
机构署名:
本校为其他完成单位
主权项:
1.一种致病性大肠杆菌噬菌体口服制剂,其特征在于,所述口服制剂由噬菌体、多孔淀粉和海藻酸钠等主要原料制备而成;所述噬菌体为噬菌体菌株Phage-HY19,所述菌株已于2019年04月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号),其保藏号为CGMCC No.17584。 2.根据权利要求1所述的致病性大肠杆菌噬菌体口服制剂,其特征在于,所述噬菌体菌株对于产肠毒素型大肠杆菌ETEC-K88ac具有强的裂解作用。 3.根据权利要求1所述的致病性大肠杆菌噬菌体口服制剂,其特征在于,所述的致病性大肠杆菌噬菌体口服制剂的制备方法包括如下步骤: 步骤一,噬菌体悬液的制备:将噬菌体Phage-HY19按最佳MOI加入到培养至对数生长期的宿主菌E.coli-HuNHY19(保藏号为CGMCC No.17622)培养液中,再加入CaCl2至终浓度1mM,37℃,150rpm摇振培养12h,12000×g,4℃,离心10min,取上清,上清液经0.22μm的无菌滤器过滤,而后加入MgSO4溶液至终浓度2mM,调整滴度至4×108pfu/mL,得到噬菌体悬液; 步骤二,向步骤一制备得到的噬菌体悬液中加入其体积30%的多孔淀粉,室温下搅拌均匀,得到悬浮液; 步骤三,将步骤二的悬浮液与等体积的质量浓度为3%的海藻酸钠溶液混合,充分混匀后,加入步骤二的悬浮液体积5%的CaCl2溶液(质量浓度为5%),充分混匀后经喷雾干燥设备脱水,制剂粒径分布在15-50μm,制备得到致病性大肠杆菌噬菌体口服制剂。 4.一种致病性大肠杆菌噬菌体口服制剂的制备方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤: 步骤一,噬菌体悬液的制备:将噬菌体Phage-HY19按最佳MOI加入到培养至对数生长期的宿主菌E.coli-HuNHY19(保藏号为CGMCC No.17622)培养液中,再加入CaCl2至终浓度1mM,37℃,150rpm摇振培养12h,12000×g,4℃,离心10min,取上清,上清液经0.22μm的无菌滤器过滤,而后加入MgSO4溶液至终浓度2mM,调整滴度至4×108pfu/mL,得到噬菌体悬液; 步骤二,向步骤一制备得到的噬菌体悬液中加入其体积30%的多孔淀粉,室温下搅拌均匀,得到悬浮液; 步骤三,将步骤二的悬浮液与等体积的质量浓度为3%的海藻酸钠溶液混合,充分混匀后,加入步骤二的悬浮液体积5%的CaCl2溶液(质量浓度为5%),充分混匀后经喷雾干燥设备脱水,制剂粒径分布在15-50μm,制备得到致病性大肠杆菌噬菌体口服制剂; 所述噬菌体为噬菌体菌株Phage-HY19,所述菌株已于2019年04月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号),其保藏号为CGMCC No.17584。 5.根据权利要求1所述的致病性大肠杆菌噬菌体口服制剂在制备用于动物腹泻的药物中的应用。 6.根据权利要求5所述的应用,所述腹泻是由产肠毒素型大肠杆菌ETEC-K88ac感染所导致的仔猪腹泻。
摘要:
本发明从养殖场环境中分离得到一株对于致病性大肠杆菌ETEC‑K88ac具有强裂解作用的噬菌体Phage‑HY19,并将其加工成为口服制剂,该口服制剂对引起动物腹泻的主要病原ETEC‑K88ac具有宿主范围广的特点,且所述的噬菌体制品是无毒的,可以安全地用于动物腹泻的预防和治疗中,由于采用噬菌体特异性裂解ETEC‑K88ac,能够避免抗生素使用中所导致的ETEC‑K88ac进化和耐药毒株的产生。

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