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一种重组猪表皮生长因子及其制备方法

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成果类型:
专利
发明/设计人:
唐青海;杨海;杨灿;刘会敬;王芳宇;...
申请/专利权人:
衡阳师范学院
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2019-12-02
申请/专利号:
CN201911213159.0
公开时间:
2020-02-28
公开号:
CN110845597A
主申请人地址:
421000 湖南省衡阳市珠晖区衡花路16号衡阳师范学院
代理人:
刘熙
机构署名:
本校为其他完成单位
主权项:
1.一种重组猪表皮生长因子,其特征在于,其氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。 2.编码权利要求1所述重组猪表皮生长因子的基因,其特征在于,其核苷酸序列如SEQID No:2所示。 3.一种表达重组猪表皮生长因子的重组载体,其特征在于,其包括SEQ ID No:2所示的核苷酸序列,优选的,所述载体是pGEX 4T。 4.一种重组菌,其特征在于,所述重组菌包括所述表达权利要求1所述的重组猪表皮生长因子的重组载体,优选的,所述重组菌为Rosetta(DE3)。 5.一种制备权利要求1所述的重组猪表皮生长因子的方法,其特征在于,所述方法是将权利要求4所述重组菌在LB培养基中培养,IPTG诱导。 6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述制备重组猪表皮生长因子的方法包括如下步骤: (1)重组细菌培养:将重组蛋白表达菌株菌液Rosetta(DE3)-pGEX4T-pEGF、接种于含有终浓度为200 μg·mL-1的Ampr的液体LB培养基中, 37 ℃,220 r·min-1培养2.5 h; (2)IPTG诱导表达:加入终浓度为1 mmol·L -1的IPTG溶液,28℃、220 r·min-1下诱导四小时以上; (3)蛋白的提取:取诱导后的菌液,离心收集菌体,采用PBS洗涤菌体后超声破碎,离心分离蛋白,采用GSTrap FF 亲和柱层析分离得到纯度较高的融合蛋白GST-pEGF。 7.权利要求1所述的重组猪表皮生长因子在制备提高仔猪生长性能的药物或饲料添加剂中的用途。 8.权利要求1所述的重组猪表皮生长因子在疫苗制备中的应用,具体用于促进猪源DNA病毒的增殖,具体地,在病毒增殖培养基中添加所述重组猪表皮生长因子。 9.所述病毒为猪细小病毒或猪圆环病毒2型。 10.根据权利要求9所述的应用,所述重组猪表皮生长因子在病毒增值培养基中的添加了为2-4μg/mL,优选地为2μg/mL。
摘要:
本发明涉及一种重组猪表皮生长因子及其制备方法,通过人工突变获得了高活性的重组猪表皮生长因子,对细胞的增殖活性有显著影响,对猪细小病毒和猪圆环病毒2型的增殖具有更显著促进作用,可以用于高滴度疫苗的生产。本发明所制备的重组猪表皮生长因子rpEGF对能够增强细胞增殖活力,提高病毒在宿主细胞中的增殖滴度,对于疫苗生产中提高疫苗有效成分含量、提高疫苗品质具有重要意义。

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