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一种犬细小病毒灭活疫苗及其制备方法

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成果类型:
专利
发明/设计人:
唐青海;杨海;王芳宇;杨灿;何丽芳;...
申请/专利权人:
衡阳师范学院
专利类型:
发明专利
语种:
中文
申请时间:
2019-11-07
申请/专利号:
CN201911080831.3
公开时间:
2020-03-06
公开号:
CN110859956A
主申请人地址:
421000 湖南省衡阳市珠晖区衡花路16号衡阳师范学院
代理人:
刘熙
机构署名:
本校为其他完成单位
主权项:
1.一种犬细小病毒灭活疫苗,其特征在于,其是由犬细小病毒CPV-HuN1703株经灭活制备得到,所述犬细小病毒CPV-HuN1703株,其微生物保藏编号为CGMCC No.17583;分类命名:犬细小病毒(Canine Parvovirus,CPV);保藏时间是2019年04月24日;保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心;保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所。 2.根据权利要求1所述的犬细小病毒灭活疫苗,其特征在于,所述犬细小病毒灭活疫苗还包括佐剂。 3.根据权利要求2所述的犬细小病毒灭活疫苗,其特征在于,所述佐剂为氢氧化铝胶、矿物油、Gel 01、蜂胶、ISA206和ISA760VG中的一种或几种。 4.根据权利要求2所述的犬细小病毒灭活疫苗,其特征在于,所述佐剂为ISA206。 5.根据权利要求1-4任一项所述的犬细小病毒灭活疫苗,其特征在于,,所述犬细小病毒灭活疫苗的制备方法包括如下步骤: 步骤a,按照常规方法培养猫肾传代细胞F81:生长液为含5%胎牛血清的MEM(含青霉素钠和硫酸链霉素各100μg/mL),在37℃,5%CO2培养箱中培养传代,待细胞生长至80%汇合度时,用PBS洗涤1次后更换为无血清培养基; 步骤b,取含量为5×104TCID50/ml 的犬细小病毒CPV-HuN1703株按5%的体积百分比接种到步骤a制备的长势良好的F81细胞,37℃吸附1小时,弃去吸附液,补加含有10 μg/mL胰蛋白酶的MEM作为维持液继续培养; 步骤c,接毒后,每日观察3次,记录细胞病变(CPE)情况,待细胞病变率达80%以上时进行收获,-80℃反复冻融三次,8000 rpm离心15min,收集上清液,即为病毒液; 步骤d,将步骤c制备得到的病毒液经20倍浓缩后,加入0.2%甲醛37℃灭活24小时得到犬细小病毒CPV-HuN1703株疫苗原液; 步骤e,将犬细小病毒CPV-HuN1703株疫苗原液和佐剂在无菌环境中搅拌混合均匀,即制得所述灭活疫苗。 6. 根据权利要求1-5中任一项所述的犬细小病毒灭活疫苗,所述灭活疫苗中含有犬细小病毒CPV-HuN1703株≥5.5×105TCID50/头份,ISA206 50%(V/V)。 7.根据权利要求1-6中任一项所述的犬细小病毒灭活疫苗在制备用于预防犬细小病毒感染药物中的应用,所述犬细小病毒感染导致的病症为犬病毒性肠炎、犬传染性肠炎、或者犬非脓性心肌炎。 8.根据权利要求7所述的应用,所述疫苗的使用方式为肌肉注射或滴鼻免疫,更进一步优选为肌肉注射。
摘要:
本发明基于湖南衡阳地区流行的CPV毒株,筛选得到一株致病性较强的强度毒株,并将其灭活后制备得到的灭活疫苗对动物而言具有很高的保护水平,且其能够有效刺激接种动物产生有效水平的IgG抗体,试验表明CPV‑HuN1703株灭活疫苗能够应对不同CPV毒株的感染,而其他疫苗毒株对于动物的保护率都不及本发明的疫苗株;本发明的CPV‑HuN1703疫苗毒株具有良好的免疫原性,能够很好的刺激机体产生有效的抗体,且抗体产生水平高,对动物的保护性能最高。

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