一种分离纯化猪血浆球蛋白的方法
发明/设计人：
杨海;唐青海;王芳宇;杨灿;刘会敬;...
申请/专利权人：
衡阳师范学院
申请/专利号：
CN201910754962.9
申请时间：
2019-08-15
公开号：
CN110467664A
公开时间：
2019-11-19
主申请人地址：
421000 湖南省衡阳市雁峰区黄白路165号
摘要：
本发明公开了一种分离纯化猪血浆球蛋白的方法，包括：步骤一、富含球蛋白的沉淀制备：调节蛋白含量至5％；调节pH值以及温度；乙醇加入完毕后再调节PH；搅拌反应；用14.5％乙醇平衡液荡洗离心杯，离心杯预冷，制品离心，取上清液，将所述上清液降温至‑4.8～‑5.5℃后过滤，备用；步骤二、球蛋白的分离：球蛋白的制作分离；球蛋白压滤分离；步骤三、球蛋白的纯化。本发明仅对猪血浆球蛋白建立提取工艺，所得产品为单一蛋白；通过调控温度、pH等参数，综合利用乙醇沉淀和透析技术，目的蛋白具有高纯度和高提取率；采用的材料价格低廉，极大了降低成本；整个分离纯化过程不到10小时，分离效率高；猪血浆球蛋白为高附加值产品，可以显著提高猪血的利用价值。
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一种猪流行性腹泻病毒基因工程抗原和抗体
发明/设计人：
唐青海;孙国印;魏平华;杨海;李晓楠;...
申请/专利权人：
衡阳师范学院<&wdkj&>南阳市天华制药有限公司<&wdkj&>广州格雷特生物科技有限公司
申请/专利号：
CN201811617350.7
申请时间：
2018-12-28
公开号：
CN109517044A
公开时间：
2019-03-26
主申请人地址：
421002 湖南省衡阳市珠晖区衡花路16号
摘要：
本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒基因工程抗原和抗体，以该病毒经典毒株和变异毒株为基础材料，经试验验证，将原有的遗传基因序列进行了系统的改造、优化、人工从头合成，分别得到了源自经典毒株的三条保护性抗原基因，以及源自变异毒株的三条保护性抗原基因，将六条基因分别与原核表达载体连接，筛选鉴定后得到重组表达菌株；经IPTG诱导得目的蛋白；将六种蛋白纯化，按照质量比为1:1:(2‑4):1:1:(2‑4)的比例混合，加入白油或其他免疫增强剂，制备成油包水型的免疫原。免疫蛋鸡，收集鸡蛋，从卵黄中提取卵黄抗体。新生哺乳仔猪口服该抗体制剂，能够预防猪流行性腹泻经典毒株和变异毒株的感染，大大提高了临床使用范围，提高了治疗和预防效果。
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猪腺病毒3型Protease蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗体制备
作者：
吴思雯;胡聪;唐青海;韩涛涛;刘祯珍;...
期刊：
中国畜牧兽医 ,2019年46(6):1764-1773 ISSN：1671-7236
作者机构：
衡阳师范学院生命科学与环境学院,衡阳师范学院畜禽养殖生物工程技术研究所,生物资源保护与利用衡阳市重点实验室,衡阳421008;[唐青海; 李彦; 吴思雯; 胡聪; 王芳宇; 向冬梅; 韩涛涛; 杨海; 王姝姝; 刘祯珍] 衡阳师范学院
关键词：
猪腺病毒3型(PADV3);Protease基因;表达;多克隆抗体
摘要：
试验旨在研究猪腺病毒3型(PADV3) Protease蛋白在大肠杆菌中的表达,并制备该蛋白的多克隆抗体.利用PCR扩增PADV3 Protease基因,构建重组原核表达载体pET28a-PADV3-Protease和真核表达载体pEGFP-PADV3-Protease,采用双酶切和测序鉴定;将原核表达载体pET28a-PADV3-Protease转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞得到重组原核表达菌株,经IPTG诱导收集蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting鉴定,将目的蛋白纯化后与佐剂乳化制备免疫原免疫家兔,制备Protease蛋白多克隆抗体;将真核表达载体pEGFP-PADV3-Protease转染HEK293细胞经G418筛选建立稳定表达EGFP-Protease融合蛋白的细胞系,以该稳定表达细胞系为包被抗原,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体的免疫活性与抗体滴度.结果 显示,Protease基因开放阅读框(ORF)为615 bp,原核表达系统中Protease蛋白以包涵体形式存在,分子质量大小为23 ku,与真核细胞表达的Protease蛋白分子质量一致,该蛋白在细胞核与细胞质中均有分布,制备的Protease蛋白多克隆抗体能与EGFP-Protease融合蛋白稳定表达真核细胞系发生特异性的反应,与对照细胞无反应.本试验构建了Protease蛋白原核表达菌株和真核表达细胞株,制备的PADV3-Protease蛋白多克隆抗体免疫活性良好,为进一步研究Protease蛋白的生物学功能和PADV3的血清学诊断提供了基础材料.
语种：
中文
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一种防治鸽毛滴虫病的中草药复方制剂以及制备方法
发明/设计人：
杨海;唐青海;王芳宇;杨灿;何丽芳;...
申请/专利权人：
衡阳师范学院
申请/专利号：
CN201910780494.2
申请时间：
2019-08-22
公开号：
CN110302326A
公开时间：
2019-10-08
主申请人地址：
421000 湖南省衡阳市雁峰区黄白路165号
摘要：
本发明公开了一种防治鸽毛滴虫病的中草药复方制剂，该复方制剂包括常山、蛇床子、黄柏、百部、川椒、荆芥、白藓皮、败酱草、黄芪、甘草、远志、苦参、羌活、防风、五倍子、白术、青蒿、白头翁、花椒、地龙、茵陈以及黄精中的至少一种；一种防治鸽毛滴虫病的中草药复方制剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：原料粉碎；熬制；冻干；将冻干粉置于纯水中，制成中药混悬剂；本发明的制剂具有天然、绿色和无污染的特点，保证了动物的健康，在杀灭和控制虫体的同时，提高动物的免疫能力，降低药物的副作用，降低病死率，提高动物的生产性能；工艺流程简单适用，节能、环保，不产生废水、废气和废渣，不会对环境造成任何危害。
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犬瘟热病毒HuN-HY171124毒株H基因的克隆与序列分析
作者：
邓莉;张可;唐青海;吴广艳;李轩;...
期刊：
湖南畜牧兽医 ,2019年(5):31-36 ISSN：1006-4907
作者机构：
衡阳师范学院生命科学与环境学院,衡阳师范学院畜禽养殖生物工程技术研究所,生物资源保护与利用衡阳市重点实验室,湖南衡阳421008;[何丽芳; 唐青海; 吴广艳; 吴慧; 李轩; 王芳宇; 邓莉; 杨海; 张可; 廖慧] 衡阳师范学院
关键词：
犬瘟热病毒;巢式PCR;H基因;相似性;进化
摘要：
为克隆并分析湖南衡阳分离的犬瘟热病毒（CDV）HuN-HY171124毒株H基因,采用逆转录反应合成第一链c DNA,利用巢式PCR扩增H基因全长,将PCR产物纯化克隆至T载体中构建重组载体pMD19-T-CDVHuN-HY171124-H,经序列测定,利用DNAStar和Mega等生物信息学软件进行序列分析。结果显示,CDV HuN-HY171124毒株H基因开放阅读框（OR F）为1824 bp,编码607 aa。相似性比对结果显示,该毒株与GenBank中58株分离毒株的核苷酸相似性在90.4%～98.8%之间,与弱毒疫苗毒株核苷酸的相似性均在90%左右,与我国分离的强毒株核苷酸的相似性均在98%左右。CDV HuN-HY171124毒株H蛋白第519氨基酸氨基酸为精氨酸、第549氨基酸氨基酸为酪氨酸,均为犬源CDV H蛋白特征性氨基酸。遗传进化分析发现该毒株与我国分离的大部分毒株均属于与我国分离的大部分毒株属于Asia 1型,与现有疫苗毒株不处同一个分支。CDV HuN-HY171124毒株是一株犬源CDV,其基因型属于Asia-1型,本研究扩充了CDV区域性流行病学基础数据。
语种：
中文
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一种分离纯化猪血浆中白蛋白的方法
发明/设计人：
杨海;唐青海;王芳宇;杨灿;刘会敬;...
申请/专利权人：
衡阳师范学院
申请/专利号：
CN201910754947.4
申请时间：
2019-08-15
公开号：
CN110317260A
公开时间：
2019-10-11
主申请人地址：
421000 湖南省衡阳市雁峰区黄白路165号
摘要：
本发明公开了一种分离纯化猪血浆中白蛋白的方法，包括以下步骤：步骤一、白蛋白上清液的制备：调血浆蛋白含量至5％；调pH值以及温度；乙醇加入后调节PH；搅拌温度控制在‑4.5～‑5.0℃，搅拌2小时，离心杯预冷至‑3.0℃～‑4.5℃，装入制品，制品离心，至上清液澄清；步骤二、白蛋白的制作与分离：步骤三、白蛋白的纯化以及过滤；白蛋白沉淀纯化：白蛋白的过滤，除菌过滤、分装。本发明对猪血浆中的单一蛋白建立提取工艺；通过调控温度、pH等参数，利用乙醇沉淀和超滤技术分离目的蛋白，目的蛋白具有高纯度和高提取率；采用的材料价格低廉，降低成本；整个分离纯化过程不到10h，分离效率高；获得的猪血浆白蛋白为高附加值产品，显著提高了猪血浆的加工效益。
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一株I型犬腺病毒的分离与鉴定
作者：
易程;邓莉;唐青海;阳坤;滕威;...
期刊：
中国动物检疫 ,2019年36(2):82-87 ISSN：1005-944X
作者机构：
衡阳师范学院生命科学与环境学院,衡阳师范学院畜禽养殖生物工程技术研究所,衡阳师范学院生物药物研究所,湖南衡阳421008;[何丽芳; 唐青海; 谢璇; 滕威; 王芳宇; 阳坤; 邓莉; 杨海; 易程] 衡阳师范学院
关键词：
犬腺病毒;分离鉴定;免疫过氧化物酶单层细胞染色法
摘要：
为给I型犬腺病毒（CAV-I）后续研究提供基础材料,采集疑似犬传染性肝炎患犬粪便,用PCR方法进行CAV-I核酸检测,并运用犬肾传代细胞（MDCK）进行病毒分离培养,采用PCR和免疫过氧化物酶单层细胞染色法（IPMA）检测病毒在细胞内的繁殖状态。结果显示:患犬粪便样品PCR检测为CAV-I核酸阳性,病料接种MDCK细胞培养24 h后出现明显的"葡萄串样"细胞病变效应（CPE）;培养物血清学鉴定为CAV抗原阳性,不同代次病毒培养物均为CAV-I核酸强阳性;第9代病毒核酸序列与Gen Bank中CAV-I毒株核苷酸相似性在99.0%以上,与CAV-Ⅱ相似性仅为65.3%;该病毒与CAV-I毒株处于同一遗传分支;病毒接种MDCK后8 h内均无抗原检出,12 h后细胞核中分布大量的CAV抗原,24 h后细胞出现典型的"葡萄串样"病变,抗原在细胞中呈弥散分布。上述结果表明,分离到的毒株为CAV-I,命名为CAV-ZY180711。
语种：
中文
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一株猪致病性大肠杆菌菌株及其灭活疫苗
发明/设计人：
唐青海;易诚;唐斯萍;滕威;杨海;...
申请/专利权人：
衡阳师范学院
申请/专利号：
201911081135.4
申请时间：
2019.11.07
公开号：
110862938B
公开时间：
2020.03.06
主申请人地址：
湖南省衡阳市珠晖区衡花路16号衡阳师范学院
摘要：
本发明从发病严重的猪场分离得到一株强致病性、高致死率的猪致病性大肠杆菌E.coli‑HuNHY19，并将其灭活制备得到灭活疫苗，所述疫苗对于仔猪具有良好的免疫保护效果，其能实现仔猪对于该大肠杆菌的完全保护，对于同血清型O8的毒株也具有很好的保护效果，对于其他血清型也具有一定的免疫交叉保护效果，通过母猪免疫试验发现，所述的灭活疫苗能够很好的刺激初产母猪产生抗体，其初乳中抗体水平和衰减速度都极优于现有分离的同血清型菌株，能够实现对于哺乳期的仔猪较好的保护。
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一例猪蓝耳病的实验室诊断
作者：
邓莉;阳坤;唐青海;吴思雯;韩涛涛;...
期刊：
湖南畜牧兽医 ,2018年(06):17-21 ISSN：1006-4907
作者机构：
衡阳师范学院 畜禽养殖生物工程技术研究所/生命科学与环境学院,湖南衡阳,421008;[唐青海; 谢璇; 吴思雯; 滕威; 王芳宇; 韩涛涛; 阳坤; 邓莉; 杨海; 易程] 衡阳师范学院
关键词：
PRRSV;ORF5;RT-PCR
摘要：
运用实验室分子诊断技术对湖南岳阳某猪场一例疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染病例进行确诊,测定并分析其基因序列,为猪蓝耳病的防控提供依据。采集病猪淋巴组织提取RNA,采用逆转录—聚合酶链式反应（RT-PCR）检测病毒核酸,构建重组载体,经序列测定,利用DNAStar等生物信息学软件进行序列分析。结果显示,R T-PCR产物大小为657 bp,同源性比较结果显示,此毒株OR F5基因核苷酸序列与与经典美洲型毒株VR-2332的同源性为83.4%,与我国经典毒株CH-1a株的同源性为85.4%,与高致病性代表株HUN4和JXA1的同源性分别为84.5%和84.3%,与欧洲经典型毒株LV的同源性为62.8%,与GDZS2016和GD/YJ/2014的同源性分别为95.0%和95.9%。遗传进化分析表明,此毒株属美洲型毒株;美洲型毒株下分两个亚群,以近年来新流行的GDZS2016和GD/YJ/2014毒株为代表的Ⅰ亚群和以HuN4、JXA1和VR-2332等为代表的Ⅱ亚群,此毒株与GDZS2016和GD/YJ/2014等同属Ⅰ亚群。结果表明,此次病例是由美洲型PR R SV毒株感染引起,将此毒株命名为HuNYY201805。
语种：
中文
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一例犬瘟热的诊疗报告
作者：
廖慧;唐青海;彭光亮;韩涛涛;曾繁荣;...
期刊：
湖南畜牧兽医 ,2018年(3):44-47 ISSN：1006-4907
作者机构：
衡阳师范学院生命科学与环境学院生物技术重点实验室;[彭光亮] 衡阳市超然动物医院;[曾繁荣] 衡阳市动物疫病预防与控制中心;[唐青海; 黎露; 吴思雯; 韩涛涛; 杨海; 易程; 廖慧] 衡阳师范学院
关键词：
犬瘟热病毒;胶体金;序列分析
摘要：
对一例疑似犬瘟热（CD）的病例进行诊断及治疗,分别采用胶体金试纸条检测、采用逆转录-聚合酶链式反应（R T-PCR）检测病原抗原和犬瘟热病毒（CDV）N基因序列分析。结果显示,病犬鼻分泌物经胶体金检测为CDV抗原弱阳性,RT-PCR产物大小为287 bp,此毒株N基因核苷酸序列与野毒株的核苷酸序列同源性高达96.5%~98.6%,遗传进化分析显示,该毒株与疫苗株（Onderstepoort、CDV3等）和Lederle等弱毒株不在同一分支上,而与野毒株在同一分支,说明该毒株为CDV强毒株,将此分离株命名为CDV-Hu NHY171124。采用中西结合的抗病毒治疗方案对病犬进行为期7 d的治疗,疗效不显著,病情恶化而接受安乐死。
语种：
中文
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一例猪伪狂犬病野毒感染的实验室诊断
作者：
黎露;韩涛涛;吴思雯;唐青海;杨海;...
期刊：
中国动物检疫 ,2018年35(9):77-80 ISSN：1005-944X
作者机构：
衡阳师范学院生命科学与环境学院生物技术重点实验室,湖南衡阳,421008;[何丽芳; 唐青海; 黎露; 吴思雯; 王芳宇; 韩涛涛; 张倩; 杨海; 刘最] 衡阳师范学院
关键词：
猪伪狂犬病毒;分离培养;免疫过氧化物酶单层细胞染色法
摘要：
为确诊衡阳市某猪场育肥猪发生的疑似猪伪狂犬病(PR)疫情,采集发病猪脾脏,运用PCR方法进行猪伪狂犬病病毒(PRV)核酸检测,利用非洲绿猴肾细胞(Vero)进行病毒分离培养,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)进行病毒血清学鉴定;用分离培养物进行家兔感染试验,观察临床症状和病例剖检变化,采用PCR检测各器官中的病毒分布情况.结果显示:病料接种Vero细胞培养3 d后,出现明显的细胞病变效应(CPE);分离培养的病毒与PRV阳性血清呈阳性反应;家兔感染后出现奇痒等神经症状并死亡,其肝、脾组织均为PRV gE核酸检测阳性.试验结果证实,分离到的病毒为PRV野毒,从而确诊了该疑似疫情.
语种：
中文
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PEDV CH-HeB14株S1蛋白表达及其多克隆抗体的制备
作者：
唐青海;李晓蓉;杨海;黎露;陈果亮;...
期刊：
西北农林科技大学学报(自然科学版) ,2018年46(4):1-12 ISSN：1671-9387
作者机构：
衡阳师范学院生命科学与环境学院生物药物研究所衡阳师范学院湖南益豚生态农业有限责任公司联合研究中心, 湖南, 衡阳, 421008;中国科学院武汉病毒研究所, 湖北, 武汉, 430071;[唐青海; 杨海; 黎露; 陈果亮; 何丽芳; 刘最; 王芳宇] 衡阳师范学院生命科学与环境学院生物药物研究所衡阳师范学院湖南益豚生态农业有限责任公司联合研究中心, 湖南, 衡阳, 421008;[李晓蓉] 中国科学院武汉病毒研究所, 湖北, 武汉, 430071
关键词：
猪流行性腹泻病毒;S1蛋白;多克隆抗体
摘要：
【目的】制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)CH-HeB14毒株S1蛋白的多克隆抗体,为PEDV新流行毒株诊断试剂盒和疫苗研制提供基础材料。【方法】利用RT-PCR扩增PEDV CH-HeB14毒株S1基因,对序列特征进行生物信息学分析,用PCR将S1基因截成不同片段(S1A、S1B、S1C、S1C-1和S1C-2),分别克隆至原核表达载体pET28a,转化BL21(DE3)构建重组表达菌株;用IPTG诱导重组蛋白表达,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。将表达蛋白与佐剂乳化制备免疫原免疫兔多克隆抗体,Western blotting和免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体的免疫活性。【结果】 PEDV S1、S1A、S1B、S1C、S1C-1和S1C-2片段长度依次为2 079,600,600,878,549和447 bp。系统进化树表明,CH-HeB14株与2010年以来的22个新流行毒株亲缘关系较近,而与经典疫苗株CV777、attenuated DR13亲缘关系较远。成功截短表达了S1蛋白不同区段S1A、S1B和S1C-1重组蛋白(rS1A、rS1B和rS1C-1),且蛋白均以包涵体形式表达。制备了抗rS1A、rS1B和rS1C-1蛋白的多克隆抗体,其与这3种蛋白反应良好,且抗rS1A重组蛋白的多克隆抗体Western blotting效价为1∶32 000;IPMA结果显示,该抗体能与PEDV CH-HeB14毒株和经典疫苗毒株attenuated DR13均发生特异性反应。【结论】成功克隆、表达了变异毒株PEDV CH-HeB14的S1基因,所制备的S1蛋白多克隆抗体具有良好的免疫活性。
语种：
中文
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New detecting materials for porcine epidemic diarrhea virus
作者：
Siping Tang;Qinghai Tang;Zhifeng Xu;Biao Gu;Fuxing Zhang
作者机构：
[Siping Tang; Qinghai Tang; Zhifeng Xu; Biao Gu; Fuxing Zhang] Department of Chemistry and Material Science, Hengyang Normal University
会议名称：
第四届先进材料国际会议
会议时间：
2018-11-15
会议地点：
江苏镇江
会议论文集名称：
第四届先进材料国际会议论文集
关键词：
Porcine epidemic diarrhea virus;Molecular imprinted polymers;Artificial antibody
摘要：
Porcine epidemic diarrhea(PED)is an acute intestinal infectious disease caused by porcine epidemic diarrhea virus(PEDV).PED occurs highly in ten days piglets,with a mortality rate of 100%.Colloidal gold immunochromatography assay and enzymelinked immunosorbent assay(ELISA)are the most widely used for the detection of PEDV.Both methods require natural antibodies whose activity are greatly affected by environmental factors seriously.So we prepare the artificial antibody of PEDV,a kind of nanomolecular imprinted polymers synthesized by solid reaction method with the epitope of PEDV as the template molecule.The antigen PEDV detected by artificial antibody through pseudo enzyme linked immunosorbent assay will be discussed.
语种：
英文
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黑曲霉发酵柑橘皮产蛋白工艺优化研究
作者：
王雁灿;杨灿;唐小武;雷涵;罗露;...
期刊：
黑龙江畜牧兽医 ,2018年(20):157-159 ISSN：1004-7034
作者机构：
衡阳师范学院 生命科学与环境学院,湖南衡阳,421008;嘉吉饲料(长沙)有限公司,长沙,410126;[唐青海; 杨灿; 罗露; 雷涵; 杨海; 王雁灿; 唐姣玉] 衡阳师范学院;[唐小武] 嘉吉饲料长沙有限公司
关键词：
柑橘皮;粗蛋白;黑曲霉;发酵;粗脂肪
摘要：
为了改善柑橘皮的营养价值,试验以粗蛋白提高幅度为衡量标准,采用单因素试验设计探讨黑曲霉发酵柑橘皮的最适宜发酵时间、接种比例、底物组合以及水的添加量。结果表明：当底物红薯与柑橘皮添加比例为1∶1,加水10 mL,接种10%的黑曲霉孢子悬液,发酵第4天时发酵产物的粗蛋白含量最高（8.23%）,较发酵前提高了41.17%;发酵产物的粗脂肪含量从1.71%提高到2.13%,提高了24.56%。说明通过黑曲霉固态发酵可以增加柑橘皮的粗蛋白含量。
语种：
中文
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人抗凝血酶Ⅲ研究进展
作者：
刘倩;符潮;唐青海;杨海
期刊：
衡阳师范学院学报 ,2018年39(03):128-132 ISSN：1673-0313
作者机构：
衡阳师范学院 生命科学与环境学院,湖南 衡阳 421008;赣南师范大学 生命与环境科学学院,江西 赣州 341000;赣南师范大学 生命与环境科学学院,江西 赣州,341000;衡阳师范学院 生命科学与环境学院,湖南 衡阳,421008;[唐青海; 杨海; 刘倩] 衡阳师范学院
关键词：
人抗凝血酶Ⅲ;基因结构;蛋白结构;生物功能;重组表达;研究进展
摘要：
人抗凝血酶Ⅲ(Human Antithrombin,hATⅢ)是机体抗凝系统发挥其生理功能的主要因子,对血液循环、血浆渗透压平衡、止血抗凝、抗炎等机制均具有重要作用,与各种疾病的表征高度相关.该文综述了hATⅢ 的基因结构、蛋白结构、生物功能以及其重组表达等方面的研究进展,对hATⅢ 的研究进行了展望,旨在为hATⅢ 研究工作者提供参考.
语种：
中文
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地方师范院校动物科学专业探索——以衡阳师范学院为例
作者：
唐青海;杨海;杨灿
期刊：
西部素质教育 ,2018年4(19):162-163 ISSN：2095-6401
作者机构：
衡阳师范学院生命科学与环境学院,湖南 衡阳,421000;[唐青海; 杨灿; 杨海] 衡阳师范学院
关键词：
师范院校;动物科学专业;师资建设
摘要：
为了提升地方师范院校动物科学专业的教学质量,文章以衡阳师范院校为例,阐述了地方师范院校开办动物科学专业背景,指出了地方师范院校动物科学专业开设的成效,提出了地方师范院校动物科学专业开办存在的问题及对策。
语种：
中文
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大蒜素对热应激湘黄鸡生产性能及营养物质代谢的影响
作者：
唐姣玉;谢宇洁;刘兆辉;唐青海
期刊：
江苏农业学报 ,2017年33(3):638-641 ISSN：1000-4440
作者机构：
衡阳师范学院生命科学与环境学院, 湖南, 衡阳, 421008;衡阳市第八中学, 湖南, 衡阳, 421001;[唐姣玉; 刘兆辉; 唐青海] 衡阳师范学院生命科学与环境学院, 湖南, 衡阳, 421008;[谢宇洁] 衡阳市第八中学, 湖南, 衡阳, 421001
关键词：
大蒜素;湘黄鸡;热应激;生产性能;营养物质代谢
摘要：
本试验旨在探讨大蒜素对热应激湘黄鸡生产性能和营养物质代谢的影响。将30日龄湘黄鸡100只随机分为5组:对照组,饲喂基础日粮,室温(22±1)℃,相对湿度40% ~ 50%;热应激组,饲喂基础日粮,室温(31 ±2) ℃,相对湿度80% ~ 90%;A1、A2、A3组分别在基础日粮中按比例加入100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg的大蒜素,室温(31±2) ℃,相对湿度80%~90%。结果发现,A1组、A2组、A3组日增质量、平均日采食量显著高于热应激组(P<0.05),死亡率显著低于热应激组(P<0.05),其中A2组降低死亡率效果最好。A2、A3组料质量比显著低于热应激组(P<0.05)。A2组血清总蛋白(TP)、球蛋白(GLB)显著高于热应激组(P<0.05),血液葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)含量显著低于热应激组(P<0.05)。A1组、A2组、A3组胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)含量与热应激组之间差异不显著(P>0.05)。结果提示,在日粮中添加大蒜素可以调节热应激湘黄鸡的糖和蛋白质代谢,提高湘黄鸡的生产性能,其中以添加200 mg/kg大蒜素效果最好。
语种：
中文
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猪ELF4基因的克隆、蛋白表达及其多克隆抗体制备
作者：
王瑾;唐青海;谷雅静;李晓楠;李羽;...
期刊：
畜牧兽医学报 ,2017年48(3):425-435 ISSN：0366-6964
作者机构：
[王瑾; 唐青海; 谷雅静; 李晓楠; 李羽; 王雪雨; 姚伦广; 阚云超] 南阳师范学院, 河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室;[王瑾; 唐青海; 谷雅静; 李晓楠; 李羽; 王雪雨; 姚伦广; 阚云超] 昆虫生物反应器河南省工程实验室, 南阳, 473061
关键词：
猪ELF4蛋白;原核表达;免疫
摘要：
本研究旨在克隆猪转录因子ELF4基因,体外表达ELF4蛋白并制备抗该蛋白的多克隆抗体。采用RTPCR扩增猪ELF4基因,运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码氨基酸序列特征,将其克隆至原核表达载体 pET28 a,构建重组表达载体pET28 a-pELF4,转化Rosetta(DE3)菌株,在不同温度、IPTG浓度、诱导时间等条件下进行诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白表达,重组pELF4蛋白(rpELF4)经纯化免疫鸡制备抗 pELF4抗体。结果表明,pELF4开放阅读框为1 989 bp(GenBank No.:KU097322),编码662个氨基酸,该基因与已经测定的人、牛、小鼠的ELF4的核苷酸相似性依次为89.4%、90.7%和81.1%,与牛等大动物的亲缘关系相对较近,与人和小鼠亲缘关系相对较远;结果显示,成功表达了重组蛋白pELF4,rpELF4分子量为95 ku,该蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,在37℃条件下,以终浓度为0.8 mmol·L~(-1)IPTG诱导8 h包涵体表达量达到最高。第4次免疫后第13天,鸡抗rpELF4抗体滴度达到1︰256 000倍以上。本试验利用原核表达系统成功制备了重组pELF4蛋白,并制备了免疫活性和特异性良好的鸡抗pELF4多克隆抗体,为该蛋白生物学功能及相关疾病研究提供了基础材料。
语种：
中文
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热应激对湘黄鸡血液生化指标的影响
作者：
唐姣玉;刘艳;杨灿;唐青海
期刊：
中国家禽 ,2017年39(5):66-68 ISSN：1004-6364
作者机构：
衡阳师范学院生命科学与环境学院,湖南衡阳,421008;[唐青海; 刘艳; 杨灿; 唐姣玉] 衡阳师范学院
关键词：
湘黄鸡;营养物质代谢;血液生化指标
摘要：
试验旨在探讨热应激对湘黄鸡血液生化指标的影响。将30日龄80只湘黄鸡随机分为2组：对照组饲养室温度（22±1）℃,相对湿度40%-50%;热应激组饲养室温度（31±2）℃,相对湿度80%-90%。试验期为15 d。试验结束时,翅静脉采血,测血液生化指标。结果显示：热应激组血清葡萄糖、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、尿素氮、Mg-（2＋）及Cl--显著高于对照组（P〈0.05）,血液总蛋白、球蛋白、K-＋、磷、CO2分压显著低于对照组（P〈0.05）。结果提示,热应激导致湘黄鸡血清离子浓度及体内营养物质代谢发生改变。
语种：
中文
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猪流行性腹泻病毒CH-HuN1301株N基因重组表达载体的构建及稳定表达细胞系的建立
作者：
唐青海;杨海;黎露;陈果亮;何丽芳;...
期刊：
中国畜牧兽医 ,2017年44(8):2261-2268 ISSN：1671-7236
作者机构：
衡阳师范学院生命科学与环境学院,衡阳 421008;衡阳师范学院生物药物研究所,衡阳 421008;衡阳师范学院湖南益豚生态农业有限责任公司联合研究中心,衡阳 421008;[何丽芳; 唐青海; 黎露; 王芳宇; 陈果亮; 杨海; 刘最] 衡阳师范学院
关键词：
猪流行性腹泻病毒;CH-HuN1301毒株;N基因;稳定细胞系
摘要：
本研究旨在建立猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）CH-HuN1301株N蛋白稳定表达细胞系。采用RT-PCR扩增PEDV新流行毒株CH-HuN1301株N基因,分别克隆至原核表达载体pET28a和真核表达载体pEGFP-C1构建重组表达载体,所测定的序列采用Mega 5.0软件进行进化分析。将原核表达的N蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,重组真核表达载体pEGFP-PEDV-N转染HEK293细胞,经用G418筛选获得稳定的表达细胞系。荧光倒置显微镜观察细胞荧光,免疫过氧化物酶单层细胞染色法（IPMA）检测N蛋白的表达。结果表明,PEDV HuN1301-14毒株N基因大小为1 323bp,原核表达重组N蛋白分子质量约60ku,其多克隆抗体与PEDV呈特异性反应,荧光倒置显微镜观察和IPMA检测结果显示N蛋白在HEK293细胞中稳定表达。该细胞系的建立为进一步研究PEDV的诊断方法提供了基础材料。
语种：
中文
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