作者： 易程;邓莉;唐青海;阳坤;滕威;...

期刊： 中国动物检疫,2019年36(2):82-87 ISSN：1005-944X

作者机构： 衡阳师范学院生命科学与环境学院,衡阳师范学院畜禽养殖生物工程技术研究所,衡阳师范学院生物药物研究所,湖南衡阳421008;[何丽芳; 唐青海; 谢璇; 滕威; 王芳宇; 阳坤; 邓莉; 杨海; 易程] 衡阳师范学院

关键词： 犬腺病毒;分离鉴定;免疫过氧化物酶单层细胞染色法

摘要： 为给I型犬腺病毒（CAV-I）后续研究提供基础材料,采集疑似犬传染性肝炎患犬粪便,用PCR方法进行CAV-I核酸检测,并运用犬肾传代细胞（MDCK）进行病毒分离培养,采用PCR和免疫过氧化物酶单层细胞染色法（IPMA）检测病毒在细胞内的繁殖状态。结果显示:患犬粪便样品PCR检测为CAV-I核酸阳性,病料接种MDCK细胞培养24 h后出现明显的"葡萄串样"细胞病变效应（CPE）;培养物血清学鉴定为CAV抗原阳性,不同代次病毒培养物均为CAV-I核酸强阳性;第9代病毒核酸序列与Gen Bank中CAV-I毒株核苷酸相似性在99.0%以上,与CAV-Ⅱ相似性仅为65.3%;该病毒与CAV-I毒株处于同一遗传分支;病毒接种MDCK后8 h内均无抗原检出,12 h后细胞核中分布大量的CAV抗原,24 h后细胞出现典型的"葡萄串样"病变,抗原在细胞中呈弥散分布。上述结果表明,分离到的毒株为CAV-I,命名为CAV-ZY180711。

语种： 中文

作者： 黎露;韩涛涛;吴思雯;唐青海;杨海;...

期刊： 中国动物检疫,2018年35(9):77-80 ISSN：1005-944X

作者机构： 衡阳师范学院生命科学与环境学院生物技术重点实验室,湖南衡阳,421008

关键词： 猪伪狂犬病毒;分离培养;免疫过氧化物酶单层细胞染色法

摘要： 为确诊衡阳市某猪场育肥猪发生的疑似猪伪狂犬病(PR)疫情,采集发病猪脾脏,运用PCR方法进行猪伪狂犬病病毒(PRV)核酸检测,利用非洲绿猴肾细胞(Vero)进行病毒分离培养,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)进行病毒血清学鉴定;用分离培养物进行家兔感染试验,观察临床症状和病例剖检变化,采用PCR检测各器官中的病毒分布情况.结果显示:病料接种Vero细胞培养3 d后,出现明显的细胞病变效应(CPE);分离培养的病毒与PRV阳性血清呈阳性反应;家兔感染后出现奇痒等神经症状并死亡,其肝、脾组织均为PRV gE核酸检测阳性.试验结果证实,分离到的病毒为PRV野毒,从而确诊了该疑似疫情.

语种： 中文

作者： 刘最;何丽芳;陈晓华;滕涛;李玉中

期刊： 纤维素科学与技术,2018年26(2):46-52 ISSN：1004-8405

作者机构： [刘最; 何丽芳; 陈晓华; 滕涛; 李玉中] 衡阳师范学院生命科学与环境学院, 湖南, 衡阳, 421008

关键词： 纤维素降解真菌;筛选;FPAase酶活;稻草降解;冬克青霉

摘要： 以滤纸条为唯一碳源培养基对富含纤维素的土样微生物进行富集培养,再用刚果红纤维素琼脂培养基筛选降解效果好的菌株,根据菌落形态及显微结构进行鉴定,并测定其发酵液的FPAase酶活和对稻草秸秆的降解情况。通过刚果红纤维素琼脂培养基筛选得到的最具纤维素分解能力的真菌经形态鉴定为冬克青霉（Penicillium donkii）,该菌在含有羧甲基纤维素钠的液体培养基中28℃,180 r/min培养,在第8d酶活力达到最大为15.0 U/m L。接种菌株21d的稻草纤维素含量由接种前的30.30%减少至26.36%。青霉1-4为冬克青霉,对纤维素有一定的降解能力,可以加速对稻草秸秆中纤维素的降解。

语种： 中文

作者： 彭芳刚;宾冬梅;陈晓华;何丽芳;李建周;...

期刊： 教育现代化,2018年5(41):36-37 ISSN：2095-8420

作者机构： 衡阳师范学院生命科学与环境学院,湖南 衡阳

关键词： 食品添加剂;理论教学体系;应用型

摘要： 为实现应用型本科人才的培养目标,针对现有的《食品添加剂》理论教学体系中存在的问题,通过以应用性为主导,保证时效性,突出系统性和侧重性,强调基础性和安全性,并注重前沿性等一系列改革,构建《食品添加剂》课程的理论教学体系.

语种： 中文

作者： 唐青海;李晓蓉;杨海;黎露;陈果亮;...

期刊： 西北农林科技大学学报(自然科学版),2018年46(4):1-12 ISSN：1671-9387

作者机构： 衡阳师范学院生命科学与环境学院生物药物研究所衡阳师范学院湖南益豚生态农业有限责任公司联合研究中心, 湖南, 衡阳, 421008;中国科学院武汉病毒研究所, 湖北, 武汉, 430071;[唐青海; 杨海; 黎露; 陈果亮; 何丽芳; 刘最; 王芳宇] 衡阳师范学院生命科学与环境学院生物药物研究所衡阳师范学院湖南益豚生态农业有限责任公司联合研究中心, 湖南, 衡阳, 421008;[李晓蓉] 中国科学院武汉病毒研究所, 湖北, 武汉, 430071

关键词： 猪流行性腹泻病毒;S1蛋白;多克隆抗体

摘要： 【目的】制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)CH-HeB14毒株S1蛋白的多克隆抗体,为PEDV新流行毒株诊断试剂盒和疫苗研制提供基础材料。【方法】利用RT-PCR扩增PEDV CH-HeB14毒株S1基因,对序列特征进行生物信息学分析,用PCR将S1基因截成不同片段(S1A、S1B、S1C、S1C-1和S1C-2),分别克隆至原核表达载体pET28a,转化BL21(DE3)构建重组表达菌株;用IPTG诱导重组蛋白表达,并进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。将表达蛋白与佐剂乳化制备免疫原免疫兔多克隆抗体,Western blotting和免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体的免疫活性。【结果】 PEDV S1、S1A、S1B、S1C、S1C-1和S1C-2片段长度依次为2 079,600,600,878,549和447 bp。系统进化树表明,CH-HeB14株与2010年以来的22个新流行毒株亲缘关系较近,而与经典疫苗株CV777、attenuated DR13亲缘关系较远。成功截短表达了S1蛋白不同区段S1A、S1B和S1C-1重组蛋白(rS1A、rS1B和rS1C-1),且蛋白均以包涵体形式表达。制备了抗rS1A、rS1B和rS1C-1蛋白的多克隆抗体,其与这3种蛋白反应良好,且抗rS1A重组蛋白的多克隆抗体Western blotting效价为1∶32 000;IPMA结果显示,该抗体能与PEDV CH-HeB14毒株和经典疫苗毒株attenuated DR13均发生特异性反应。【结论】成功克隆、表达了变异毒株PEDV CH-HeB14的S1基因,所制备的S1蛋白多克隆抗体具有良好的免疫活性。

语种： 中文

作者： 陈晓华;邓乐天;李建周;孙雅艺;谢玲;...

期刊： 教育教学论坛,2018年(13):12-13 ISSN：1674-9324

作者机构： 衡阳师范学院生命科学与环境学院,湖南 衡阳,421008

关键词： 质量管理体系;实验室;应用

摘要： 实验室是高校教学、科研工作的重要组成部分,本文将ISO9000质量管理体系的科学管理方法应用到高校实验室管理工作中,以期更好地发挥高校实验室人才培养与服务社会经济发展的作用,为高校实验室的建设与管理提供有益参考。

语种： 中文

作者： 刘最;何丽芳;李玉中;滕涛

期刊： 教育教学论坛,2018年(5):18-19 ISSN：1674-9324

作者机构： 衡阳师范学院 生命科学与环境学院,湖南 衡阳,421008;[何丽芳; 滕涛; 李玉中; 刘最] 衡阳师范学院

关键词： 创新能力;开放实验室;管理

摘要： 实验室管理在培养学生创新能力和实践能力方面发挥着重要作用。本文探讨了开放实验室管理的必要性、存在的问题、管理模式三个方面,试图寻找一套适宜的管理模式,从而充分发挥开放实验室的功能。

语种： 中文

作者： 何丽芳;阳美;刘最;王芳宇;宾冬梅;...

期刊： 食品科技,2018年43(10):50-54 ISSN：1005-9989

作者机构： 衡阳师范学院生命科学与环境学院,衡阳,421000;[何丽芳; 陈晓华; 王芳宇; 宾冬梅; 阳美; 刘最] 衡阳师范学院

关键词： 芒果皮提取液;羧甲基壳聚糖;复合涂膜;保鲜

摘要： 以巨峰葡萄为实验材料,采用0.5 mg/mL芒果皮提取液与1％羧甲基壳聚糖复合涂膜处理葡萄果实,从腐烂率、失重率、相对硬度、呼吸强度、可滴定酸含量、可溶性固形物含量、Vc含量等方面对葡萄的保鲜效果进行评价,探讨芒果皮提取液复合涂膜对巨峰葡萄保鲜效果的影响.结果表明:与未涂膜与单一涂膜组相比,复合涂膜能显著降低葡萄在贮藏过程中的腐败率和失重率,减缓葡萄相对硬度下降的速度;并且显著抑制贮藏前期葡萄的呼吸强度,进而抑制贮藏过程中可溶性固形物、可滴定酸和Vc含量的降低.由此可知,芒果皮提取液与羧甲基壳聚糖复合涂膜可用于巨峰葡萄保鲜.

语种： 中文

作者： 刘最;何丽芳;李玉中;滕涛

期刊： 教育现代化,2018年5(41):30-31 ISSN：2095-8420

作者机构： 衡阳师范学院生命科学与环境学院,湖南 衡阳

关键词： 环境微生物学;实验教学;改革

摘要： 针对目前在《环境微生物》实验教学中存在的问题,从提高实验课时、优化教学内容、改善教学条件及完善考核方式等方面提出改革措施,旨在提高实验教学质量,培养创新型人才.

语种： 中文

作者： 王芳宇;戴俊斌;谭潇;何丽芳;王德平;...

期刊： 衡阳师范学院学报,2017年38(06):100-104 ISSN：1673-0313

作者机构： 衡阳师范学院 生命科学与环境学院,功能金属有机材料湖南省重点实验室,湖南 衡阳 421008;南华大学药学与生物科学学院,湖南 衡阳 421001;三峡大学医学院,湖北 宜昌,443002;[何丽芳; 王德平; 王芳宇; 戴俊斌; 李玉林] 衡阳师范学院;[谭潇] 三峡大学

关键词： 激肽释放酶7;筛选;小分子抑制剂

摘要： 根据KLK7的晶体结构,采用美国ChemDiv化合物数据库进行计算机模拟筛选和人工挑选,并对获得的化合物进行KLK7活性抑制实验。结果表明,有4个化合物对KLK7活性具有较好的抑制作用,其IC50分别为37.166μM,25.32μM,28.955μM,36.078μM,可用于进一步的研究。

语种： 中文

作者： 王芳宇;周云;何丽芳;滕涛;杨海;...

期刊： 中国皮肤性病学杂志,2017年31(4):359-364 ISSN：1001-7089

作者机构： 衡阳师范学院生命科学与环境学院, 功能金属有机材料湖南省重点实验室, 湖南, 衡阳, 421008;Laboratory of Molecular and Functional Enzymology, UPMC-Sorbonne University, France, Paris, 75205;[王芳宇; 周云; 何丽芳; 滕涛; 杨海] 衡阳师范学院生命科学与环境学院, 功能金属有机材料湖南省重点实验室, 湖南, 衡阳, 421008;[谭潇] Laboratory of Molecular and Functional Enzymology, UPMC-Sorbonne University, France, Paris, 75205

关键词： CCR5基因;RNA干扰;人工miRNA

摘要： 目的构建人工miR-CCR5,并研究其对HIV-1感染宿主细胞的影响。方法以miR-155为基础骨架,根据HIV-1 CCR5基因序列设计并合成4对miRNA寡聚单链DNA,构建4个人工miR-CCR5。采用qPCR技术检测其对CCR5基因的沉默效率和对干扰素表达的影响;MTT法测定其对被转染细胞的毒性;抗HIV-1_(BaL)感染实验检测其对HIV-1感染的抑制作用。结果qPCR结果显示,4个人工miR-CCR5对CCR5基因都具有一定的沉默效果,其中miR-CCR54的沉默效率最高,达72% ;且不会对细胞干扰素的表达产生影响。MTT实验证实miR-CCR5-4不会影响被转染细胞的活性,此外,病毒抑制实验显示,miR-CCR5-4对HIV-1_(BaL) p24蛋白的抑制作用达70.48%,效果明显。结论所获得的miR-CCR5-4可为进一步的抗HIV-1_(BaL)感染研究提供基础。

语种： 中文

作者： 刘最;何姣姣;何丽芳;滕涛;陈晓华;...

期刊： 纤维素科学与技术,2017年25(4):42-47 ISSN：1004-8405

作者机构： [刘最; 何姣姣; 何丽芳; 滕涛; 陈晓华; 李玉中] 衡阳师范学院生命科学与环境学院, 湖南, 衡阳, 421008

关键词： 纤维素降解真菌;鉴定;纤维素酶;CMC酶活;土曲霉原变种

摘要： 利用滤纸诱导法从富含腐木土壤中分离得到一株具有纤维素降解活性的真菌菌株,用三点接种法及插片法和CYA鉴别培养基对其进行形态学鉴定,并测定了其发酵滤液的CMC酶活和其对稻草的降解效果。经鉴定该菌为土曲霉原变种(Aspergillus terreus var. terreus);28℃,180 r/min条件下,发酵8 d时,发酵原液的CMC酶活为11.057 U/mL;接种该菌21d的稻草中的纤维素含量由接种前的30.20%分别减少至24.82%。结果表明土曲霉具有一定的纤维素降解能力。

语种： 中文

作者： 唐青海;杨海;黎露;陈果亮;何丽芳;...

期刊： 中国畜牧兽医,2017年44(8):2261-2268 ISSN：1671-7236

作者机构： 衡阳师范学院生命科学与环境学院,衡阳 421008;衡阳师范学院生物药物研究所,衡阳 421008;衡阳师范学院湖南益豚生态农业有限责任公司联合研究中心,衡阳 421008

关键词： 猪流行性腹泻病毒;CH-HuN1301毒株;N基因;稳定细胞系

摘要： 本研究旨在建立猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）CH-HuN1301株N蛋白稳定表达细胞系。采用RT-PCR扩增PEDV新流行毒株CH-HuN1301株N基因,分别克隆至原核表达载体pET28a和真核表达载体pEGFP-C1构建重组表达载体,所测定的序列采用Mega 5.0软件进行进化分析。将原核表达的N蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,重组真核表达载体pEGFP-PEDV-N转染HEK293细胞,经用G418筛选获得稳定的表达细胞系。荧光倒置显微镜观察细胞荧光,免疫过氧化物酶单层细胞染色法（IPMA）检测N蛋白的表达。结果表明,PEDV HuN1301-14毒株N基因大小为1 323bp,原核表达重组N蛋白分子质量约60ku,其多克隆抗体与PEDV呈特异性反应,荧光倒置显微镜观察和IPMA检测结果显示N蛋白在HEK293细胞中稳定表达。该细胞系的建立为进一步研究PEDV的诊断方法提供了基础材料。

语种： 中文

发明/设计人： 王芳宇;谭潇;王德平;严加林;何丽芳;...

申请/专利权人： 衡阳师范学院

申请/专利号： CN201610937212.1

申请时间： 2016-11-1

公开号： CN106518880A

公开时间： 2017-03-22

主申请人地址： 421000 湖南省衡阳市珠晖区衡花路16号

摘要： 本发明公开了一种激肽释放酶7小分子抑制剂，其结构由式(I)表示。本发明还提供了该激肽释放酶7小分子抑制剂的制备方法。该激肽释放酶7小分子抑制剂可用于抑制激肽释放酶7的活性，制备治疗特应性皮炎的药物。也可以用于治疗特应性皮炎的药物组合物的有效成分，该药物组合物可以为外用膏剂或外用喷雾制剂。该抑制剂作为小分子抑制剂能有效抑制激肽释放酶7，具有应用于制备特应性皮炎的治疗药物的前景。

作者： 刘最;何丽芳;李玉中

期刊： 微生物学杂志,2017年37(5):47-52 ISSN：1005-7021

作者机构： [刘最; 何丽芳; 李玉中] 衡阳师范学院生命科学与环境学院, 湖南, 衡阳, 421008

关键词： 放线菌;多样性;系统发育

摘要： 探究台湾海峡海洋沉积物中放线菌的多样性并进行抗菌活性筛选,为发现新的药物先导化合物提供新菌源。采用7种选择性培养基分离10份来自台湾海峡沉积物样品中的海洋放线菌,并对分离菌株的16S rRNA基因序列进行系统进化分析。采用滤纸片法对部分代表放线菌菌株发酵液进行生物活性筛选,共分离到532株放线菌,挑选其中170株代表菌株进行鉴定,分属于8个目10个科14个属。有2株菌的16S rRNA基因序列显示属于潜在的新种,170株菌中有68.8%的菌株显示出至少对一种指示菌有抑菌活性。结果表明台湾海峡海洋沉积物中蕴藏着丰富的放线菌资源,是发现新药的有效途径。

语种： 中文

发明/设计人： 唐青海;杨海;王芳宇;何丽芳;唐姣玉

申请/专利权人： 衡阳师范学院

申请/专利号： CN201710091326.3

申请时间： 2017-2-21

公开号： CN106728792A

公开时间： 2017-05-31

主申请人地址： 421002 湖南省衡阳市珠晖区衡花路16号

摘要： 本发明公布了一种治疗猪支原体肺炎的中药及使用方法,各组分和重量份为：麦门冬30#120份,天门冬30#120份,熟地黄30#120份,款冬花6#24份,川贝母6#24份,玄参15#60份,紫苏叶8#32份,茯苓15#60份,黄芩5#20份,甘草6#24份。使用时直接将各组分打成粉剂混合,每10公斤体重每天加入组方药粉剂量为60g#125g添加到饲料中,连用14d以上。本中药组方在饲料中添加,疗效显著,且无残留,无毒副作用,不会引起支原体耐药性。

作者： 何丽芳;王芳宇;宾冬梅;陈晓华;彭芳刚

期刊： 教育教学论坛,2016年(46):137-138 ISSN：1674-9324

作者机构： 衡阳师范学院 生命科学与环境学院,湖南 衡阳,421008

关键词： 实践教学;应用型人才;改革;探索

摘要： 分析了食品科学与工程专业实践教学中存在的问题,从增加实践教学比例、建立高水平的创新型实践教学队伍、加大实践教学经费投入、重视大学生科技创新活动、加强校企合作等方面入手,进行食品科学与工程专业应用型人才培养的实践教学改革与探索.

语种： 中文

发明/设计人： 王芳宇;谭潇;王德平;严加林;何丽芳;...

申请/专利权人： 衡阳师范学院

申请/专利号： CN201610936016.2

申请时间： 2016-11-1

公开号： CN106518868A

公开时间： 2017-3-22

主申请人地址： 421000 湖南省衡阳市珠晖区衡花路16号

摘要： 本发明公开了一种激肽释放酶7小分子抑制剂，其结构由式(I)表示。本发明还提供了该激肽释放酶7小分子抑制剂的制备方法。该激肽释放酶7小分子抑制剂可用于抑制激肽释放酶7的活性，制备治疗特应性皮炎的药物。也可以用于组成治疗特应性皮炎的药物组合物的有效成分，该药物组合物可以为外用膏剂或外用喷雾制剂。该抑制剂作为小分子抑制剂能有效抑制激肽释放酶7，具有应用于制备特应性皮炎的治疗药物的前景。

发明/设计人： 王芳宇;谭潇;王德平;严加林;何丽芳;...

申请/专利权人： 衡阳师范学院

申请/专利号： CN201510742593.3

申请时间： 2015-11-4

公开号： CN105218555A

公开时间： 2016-01-06

主申请人地址： 421002 湖南省衡阳市珠晖区衡花路16号

摘要： 本发明公开了一种激肽释放酶7小分子抑制剂，其结构由式(I)表示。本发明还提供了该激肽释放酶7小分子抑制剂的制备方法。该激肽释放酶7小分子抑制剂可用于抑制激肽释放酶7的活性，制备治疗特应性皮炎的药物。也可以用于治疗特应性皮炎的药物组合物的有效成分，该药物组合物可以为外用膏剂或外用喷雾制剂。该抑制剂作为小分子抑制剂能有效抑制激肽释放酶7，具有应用于制备特应性皮炎的治疗药物的前景。

作者： 唐青海;彭永刚;杨海;王芳宇;何丽芳;...

期刊： 中国预防兽医学报,2016年38(11):919-922 ISSN：1008-0589

作者机构： 衡阳师范学院生命科学与环境学院生物药物研究所, 湖南, 衡阳, 421008;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所, 兽医生物技术国家重点实验室, 黑龙江, 哈尔滨, 150069;[唐青海; 杨海; 王芳宇; 何丽芳; 唐姣玉] 衡阳师范学院生命科学与环境学院生物药物研究所, 湖南, 衡阳, 421008;[彭永刚] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所, 兽医生物技术国家重点实验室, 黑龙江, 哈尔滨, 150069

关键词： 转录因子;免疫调节;研究进展

摘要： ETS(E26 transformation specific)家族分子是多细胞生物的一类转录因子,因最早在禽骨髓成红细胞增生症病毒E26所表达的融合蛋白中发现的癌基因编码的蛋白而得名。该家族蛋白结构高度保守,其中具有一段85 aa序列能够特异性地结合于DNA共有基序GGAA/T。ELF4(E74-like factor 4)是ETS家族的一员,早期被命名为骨髓elf-1(E74-like factor 1)样因子(Myeloid elf-1-like factor, MEF),在上皮细胞中能够组成性的激活溶菌酶基因、上调人β 防御素2基因的转录水平,而且被认为是X染色体上一个潜在的肿瘤抑制子。在基础水平,ELF4的转录受转录因子Sp1的调控,其反式激活功能部分被前髓细胞性白血病(Promyelocytic leukemia,PML)蛋白所调节。同时,受小泛素相关修饰蛋白(Small ubiquitin-related modifier,SUMO)的调控,人源ELF4的第657位赖氨酸被泛素化,导致ELF4对溶菌酶基因的转录反式激活能力被抑制。转录因子ELF4还参与细胞多种生理或病理过程,如肿瘤发生、DNA损伤反应和细胞周期调控。尽管这一领域的研究越来越多,但ELF4真正的生物学功能仍然不够清楚。近年来发现ELF4在机体免疫调节中起重要作用,本文主要就这方面的研究进展作一综述,以供研究者参考。

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